graph #56
Description
graph TD
A[芍药内酯苷抗肝损伤机制研究] --> B[第一部分：体内药效确定]
A --> C[第二部分：自噬调控机制]
A --> D[第三部分：铁死亡干预]
A --> E[第四部分：免疫细胞浸润调控]
A --> F[第五部分：靶点预测]
A --> G[第六部分：FGF1/AMPK/NRF2通路验证]
%% 第一部分：体内药效
B --> B1[肝功生化指标检测]
B1 -->|ELISA法| B11[ALT/AST/ALP/TBIL]
B --> B2[肝组织病理学评估]
B2 -->|H&E染色+病理评分| B21[坏死/炎症/结构变化]
B --> B3[氧化应激指标]
B3 -->|分光光度法| B31[MDA/SOD/GSH/CAT/GSH-Px]
%% 第二部分：自噬调控
C --> C1[自噬关键蛋白检测]
C1 -->|WB/IHC| C11[LC3-II/I, p62, Beclin-1, ATG5/7]
C --> C2[自噬流分析]
C2 -->|氯喹干预+WB| C21[LC3-II累积率/p62降解率]
C --> C3[自噬超微结构]
C3 -->|TEM| C31[自噬体/自噬溶酶体计数]
C --> C4[自噬-凋亡交叉调控]
C4 -->|TUNEL+多色荧光| C41[LC3 vs Cleaved Caspase-3共定位]
%% 第三部分：铁死亡
D --> D1[铁死亡标志物检测]
D1 -->|WB/IF| D11[GPX4/ACSL4/SLC7A11表达]
D1 --> D12[LC3与GPX4/ACSL4共定位]
D --> D2[铁代谢稳态]
D2 -->|铁试剂盒/普鲁士蓝/WB| D21[铁离子浓度/Ferritin/TfR1]
%% 第四部分：免疫细胞调控
E --> E1[免疫细胞浸润定量]
E1 -->|IHC/IF/流式| E11[F4/80⁺/CD68⁺巨噬细胞; Ly6G⁺/MPO⁺中性粒细胞]
E --> E2[巨噬细胞极化]
E2 -->|多重荧光+流式| E21[M1/M2表型比值]
E --> E3[中性粒细胞活化]
E3 -->|MPO活性+NETs染色| E31[Cit-H3⁺DNA⁺面积]
E --> E4[炎症因子检测]
E4 -->|qPCR/ELISA| E41[Ccl2/Cxcl1/Cxcl2/HMGB1/S100a9]
E --> E5[免疫细胞-肝细胞互作]
E5 -->|mIHC| E51[F4/80⁺-HMGB1⁺; Ly6G⁺-TUNEL⁺空间邻近性]
%% 第五部分：靶点预测
F --> F1[网络药理学]
F1 --> F11[潜在靶点/通路筛选]
F --> F2[关键基因验证]
F2 -->|qPCR/WB| F21[肝细胞/Kupffer细胞基因表达]
%% 第六部分：通路机制
G --> G1[FGF1/AMPK/NRF2激活]
G1 -->|WB/IF| G11[p-FGFR/p-AMPK/NRF2核转位/HO-1/NQO1]
G --> G2[FGF1功能挽救]
G2 -->|siRNA敲低| G21[细胞存活率/p-AMPK/NRF2核表达]
G --> G3[AMPK通路阻断]
G3 -->|AMPK抑制剂| G31[ROS水平/NRF2转位]
G --> G4[NRF2功能验证]
G4 -->|NRF2敲低| G41[GSH/MDA水平变化]
%% 逻辑关联
B --> C & D & E %% 表型驱动机制研究
F --> G %% 靶点预测引导通路验证
C & D --> F %% 自噬/铁死亡数据反馈靶点预测